中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T
1923-2007
进出口食品中草甘膦残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法
Determination
of glyphosate residues in food for import and export-
HPLC-MS/MS
method
1范围
本标准规定了食品中草甘膦残留量检验的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于大豆、小麦、大米、玉米、甘蔗、柑橙、紫苏、板栗、茶叶、虾、鱼、畜禽肉、蜂蜜、香料、人参中草甘膦(PMG)及其代谢产物氨甲基膦酸(AMPA)残留量的检测和确证。
2方法提要
试样用水提取,经阳离子交换柱(CAX)净化,与9-芴基甲基三氯甲烷[9- Fluorenylmethylchloro-formate(FMOC-CI)]衍生化反应后,用液相色谱-质谱/质谱测定,内标法定量。
3试剂和材料
除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为二次超纯水。
3.1甲醇:液相色谱纯。
3.2丙酮:液相色谱纯。
3.3二氯甲烷:液相色谱纯。
3.4 盐酸。
3.5氢氧化钾。
3.6 磷酸二氢钾。
3.7硼酸钠(Na2B4O7·10H2O)。
3.8 甲酸。
3.9 无水乙酸铵。
3.10乙腈:液相色谱纯。
3.11 20%氢氧化钾溶液:称取20 g氢氧化钾溶于适量水,并用水稀释至100 mL。
3.12 3 mol/L盐酸溶液、0.3 mol/L盐酸溶液:量取270 mL盐酸,加适量水并稀释至1
000 mL,此溶液浓度为3 mol/L;再用水稀释10倍即为0.3 mol/L。
3.13流动相A:0.1%甲酸的乙腈溶液,移取1
mL甲酸于1 000 mL乙腈中,混匀。
3.14流动相B:称取0.154 g无水乙酸铵溶解于适量水中,加入1 mL甲酸,用水定容至1 000 mL。
3.15 酸度调节剂:称取16 g磷酸二氢钾熔于160 mL水中,加入13.4 mL盐酸和40 mL甲醇,混匀。
3.16 CAX洗脱液:分别量取160mL水、2.7mL盐酸和40mL甲醇,混匀。
3.17 5%(体积分数)硼酸盐缓冲溶液(pH=9):称取5 g硼酸钠(Na2B4O7•10H2O) ,用水溶解并定溶至100 mL。
3.18 9-芴基甲基三氯甲烷[FMOC-Cl]:纯度不低于99.0%,低于5℃保存。
3.19 1.0 g/L FMOC-CI丙酮溶液:称取100 mg
FMOC-CI,用丙酮溶解并定溶至100 mL。
3.20 草甘膦(PMG)标准物质(Glyphosate,CAS 号:1071-83-6,分子式:C3H8NO3P):纯度不低于98.0%。
3.21氨甲基膦酸(AMPA)标准物质( aminomethylphosphonic acid,CAS 号: 1066-51-9,分子式:C1H6NO3P):纯度不低于98. 0%。
3.22 同位素内标1,2-C13N15草甘膦:100μg/mL水溶液。
3.23草甘膦(PMG)、氨甲基膦酸(AMPA)标准储备溶液(1.0
mg/mL):分别精确称取50 mg(±0.1 mg)的草甘膦(PMG)、氨甲基膦酸(AMPA)标准品于聚乙烯塑料瓶中,分别加入一定量的水按式(1)计算,加2滴盐酸,充分振摇,确保其全部溶解,低于5℃保存,有效期为1年。
式中:
mw——所需加水的质量,单位为克(g);
ms——标准 品的称样量,单位为毫克(mg);
Ps——标准品的纯度(100%= 1.00);
Dw——水的密度(1.00 g/mL);
Cs——标准储备液的浓度(1.0 mg/mL)。
3.24草甘膦(PMG)、氨甲基膦酸(AMPA)混合标准中间溶液:用水分别稀释成1.0μg/mL、10.0μg/mL,低于5℃保存,有效期为6个月。
3.25同位素内标1,2-C13N15草甘膦工作溶液:用水分别稀释成1.0μg/mL、10.0μg/mL,低于5℃保存,有效期为6个月。
3.26草甘膦(PMG)、氨甲基膦酸(AMPA)混合标准工作溶液:根据需要,临用时吸取一定量的混合标准中间溶液(3.24)和同位素内标工作溶液(3.25),用水稀释配制成适当浓度的混合标准工作溶液(参考线性浓度范围为0 ng/mL至10 ng/mL) ,每毫升该混合标准工作溶液含有同位素内标1,2-C13N15草甘膦6 ng。
3.27 CAX阳离子交换柱:AG 50W-X8(200目~400目),H+,0.8 cmX4 cm。使用时不采用真空泵抽气,且不得使其干涸。
注:可采用商品化的CAX小柱[ Bio-Rad Poly-Prep No. 731-6214 CA 94547,USA].或同等性能的其他小柱。
3.28水相滤膜:0.45μm。
4仪器和设备
4.1 液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾(ESI)离子源。
4.2旋转蒸发器。
4.3振荡器。
4.4 混匀器。
4.5 固相萃取装置。
4.6 离心机:水平转子,转速不低于4 000
r/min,配有250 mL塑料离心瓶。
4.7氮气吹干仪。
5试样制备与保存
5.1试样制备
5.1.1 茶叶、大豆、小麦、大米、玉米、香料、草药
取代表性样品约200g,粉碎,通过孔径为2.0mm的筛,装入洁净的容器内,密封,标明标记。
5.1.2 甘蔗、柑橙、紫苏、板栗
甘蔗:去皮、切成小段,称取约200 g,速冻后取出切成细末,混匀,装入洁净的容器内,密封,标明标记。
柑橙:取可食部分约200g,匀浆,装入洁净的容器内,密封,标明标记。
紫苏:取可食部分(不可水洗)约200g,捣碎均匀,装入洁净容器内,密封,标明标记。
板栗:取可食部分200g,粉碎,装入洁净的容器内,密封,标明标记。
5.1.3 虾、鱼、畜禽肉
从所取全部虾、鱼或畜禽肉样品中取出有代表性的可食部分约200 g,捣碎并均质,装入洁净容器内,密封,标明标记。
5.1.4 蜂蜜
取蜂蜜代表性样品200g,未结晶的样品将其用力搅拌均匀,有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧后,置于不超过60℃的水浴中温热,待样品全部溶化后搅匀,迅速冷却至室温。在溶化时应注意防止水分挥发。制备好的试样装入洁净容器内,密封,标明标记。
5.2试样保存
虾、鱼、畜禽肉试样于-18℃冷冻保存,其余试样于0℃~4℃保存。在制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生目标化合物残留量的变化。
6测定步骤
6.1 提取
称取约10 g均匀试样(茶叶试样约5 g,精que到0.01 g),置于250 mL塑料离心瓶中,加100 μL同位素内标工作溶液10 μg/mL(3. 25),加100 mL水(茶叶样品浸泡0.5 h)、50 mL二氯甲烷,振荡20
min,于4 000 r/min 离心10 min。将上层水溶液转移至另一塑料离心瓶中,残渣再加入50 mL水重复提取一次,合并上层水溶液,充分混匀后,取出4.5 mL至10 mL,塑料具塞试管中,加0.5 mL酸度调节剂(3.15),混匀。
6.2净化
CAX小柱(3. 27)经10 mL水活化后,加入1.0 mL提取液,用0.7 mL CAX洗脱液(3.16)淋洗两
次,再用11mLCAX洗脱液(3.16)洗脱并收集,洗脱液于45C减压旋转蒸发至干,加1mL5%硼酸盐
缓冲溶液(3.17)溶解残渣,此时pH约为9左右,需要时用20%氢氧化钾溶液(3.11)和3 mol/L盐酸溶液、0.3 mol/L 盐酸溶液(3.12)调节pH至9。
6.3 衍生化
取混合标准工作溶液(3.26)各1.0 mL加入200 μL 5%硼酸盐缓冲溶液(3.17),混匀。此标准系列溶液与净化后样液分别加入200 μL 1.0 g/L FMOC-CI丙酮溶液(3. 19),混匀,室温下进行衍生化反应,放置过夜。将衍生化后溶液通过0. 45 μm滤膜(3.28) ,供液相色谱串联质谱测定。
6.4 测定
6.4 测定
6.4.1液相色谱条件
a)
色谱柱:C18柱,150 mm×2.1 mm(内径),粒度5μm或相当者;
b)
流动相梯度洗脱程序见表1。
7测定低限、回收率
7.1测定低限
本方法测定低限:茶叶的测定低限为0.10mg/kg,其他样品的测定低限为0.05mg/kg。
7.2回收率
本方法添加浓度及回收率试验数据见表3。
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