5.2 测定步骤
5.2.1 提取
5.2.1.1 固体类样品:称取1g(jing确至0.01g)试样(5.1)于50mL离心管中,加入5mL乙腈饱和的正己烷溶液,涡旋1min充分混匀,浸泡10min。加入5mL饱和氯化钠溶液,用5mL正己烷饱和的乙腈溶液涡旋2min,3000r/min离心5min,收集乙腈层于试管中,再重复使用5mL正己烷饱和的乙腈溶液提取2次,合并3次提取液,加0.1%甲酸溶液调节pH=4,待净化。同时做空白试验。
5.2.1.2 油类:称取1g(jing确至0.01g)试样(5.1)于50mL离心管中,加入5mL乙腈饱和的正己烷溶液溶解样品,涡旋1min,静置10min,用5mL正己烷饱和的乙腈溶液涡旋提取2min,3000r/min离心5min,收集乙腈层于试管中,再重复使用5mL正己烷饱和的乙腈溶液提取2次,合并3次提取液,待净化。同时做空白试验。
5.2.2 净化
在C18固相萃取柱中装入约2g的无水硫酸钠(可用成品柱抗氧化剂检测专用柱),用5mL甲醇活化萃取柱,再以5mL乙腈平衡萃取柱,弃去流出液。将所有提取液(5.2.1)倾入柱中,弃去流出液,再以5mL乙腈和甲醇的混合溶液洗脱,收集所有洗脱液于试管中,40℃下旋转蒸发至干,加2mL乙腈定容,过0.22μm 有机系滤膜,供液相色谱测定。
5.2.3 凝胶渗透色谱法(纯油类样品可选)
称取样品(5.1)10g(精确至0.01g)于100mL容量瓶中,以乙酸乙酯和环己烷混合溶液定容至刻度,作为母液;取5mL母液于10mL容量瓶中以乙酸乙酯和环己烷混合溶液定容至刻度,待净化。取10mL待测液加入凝胶渗透色谱(GPC)进样管中,使用GPC净化(凝胶渗透色谱净化条件见附录B),收集流出液,40℃下旋转蒸发至干,加2mL乙腈定容,过0.22μm 有机系滤膜,供液相色谱测定。同时做空白试验。
5.3 液相色谱仪条件
a) 色谱柱:C18柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或等效色谱柱;
b) 流动相A:0.5%甲酸水溶液,流动相B:甲醇;
c) 洗脱梯度:0~5min流动相(A)50%,5min~15min:流动相(A)从50%降至20%,15min~20min流动相(A)20%,20min~25min:流动相(A)从20%降至10%,25min~27min:流动相(A)从10%增至50%,27min~30min:流动相(A)50%;
d) 柱温:35℃;
e) 进样量:5μL;
f) 检测波长:280nm。
5.4 标准曲线的制作
将系列浓度的标准工作液分别注入液相色谱仪中,测定相应的抗氧化剂,以标准工作液的浓度为横坐标,以响应值(如:峰面积、峰高、吸收值等)为纵坐标,绘制标准曲线。9种抗氧化剂液相色谱图见附录C。
关于食品an全国家标准的更多信息可点击这里下载:GB 5009.32-2016 食品中9种抗氧化剂的测定
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